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液相色谱仪仪器校准怎么做？具体校准方法是什么？
2022-12-14 12:00
液相色谱法概述
液相色谱仪是由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等部分组成的分析仪器。液相色谱仪是根据样品之中各组分在色谱柱中的固定相和流动相间的分布或吸附特性的差异，流动相将样品带入色谱柱进行分离。由检测器检测，并由数据处理系统记录。色谱图，根据各组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。
测量仪器校准
（1）环境条件
室温为（15～30）℃，仪器校准过程之中温度变化不超过3℃（对于差示折射率检测器，室温变化不超过2℃），室内相对湿度：（20～85）%。房间内不得存放易燃、易爆、强腐蚀性物品。无机械振动和电磁干扰，通风良好。
（2）仪器校准采用标准材料
a.萘-甲醇溶液标准物质：定值为1.00×10-4g/mL，扩展不确定度小于4%，K=2
b.萘-甲醇溶液标准物质：检定值为1.00×10-7g/mL，扩展不确定度小于4%，K=2
c.胆固醇甲醇溶液标准物质：标准值为200μg/mL，扩展不确定度小于2.0%，K=2。
d.甲醇之中胆固醇溶液标准品：标准值为5.0μg/mL，扩展不确定度小于5.0%，K=2。
e.胆固醇纯度标准品：标准值为99.7%，扩展不确定度小于0.1%，K=2。
（3）输液系统
a.泵的耐压性：将仪器各部分连接好，以甲醇（或纯水）为流动相，流速为0.2 mL/min。按说明书启动仪器，保持压力稳定10分钟，用滤纸检查各管道接口处是否有湿痕。取下色谱柱，堵塞泵出口端（压力传感器上方），使压力达到最大允许值的90%，保持5分钟，应无泄漏。
b.泵流量设定误差及流量稳定性：按要求设定流速，启动仪器，待压力稳定之后，用事先称量过的清洁容量瓶在流动相出口处收集流动相，用秒表计时。收集规定时间之内流出的流动相，在分析天平之上称重，计算所测流速，重复仪器校准3次。
c.梯度误差:用梯度控制装置设置梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液。将输液连接至检测器（未连接色谱柱），开机后用溶剂A冲洗系统，待基线稳定之后启动梯度程序，分5步绘制溶剂B从0%到*的梯度变化曲线。计算B溶剂变化引起的每一步对应的响应信号值的变化值，重复仪器校准两次，计算结果。
(4) 柱箱温度设定点误差和稳定性校正
a.修复将数字温度计探头置于色谱柱恒温器之中与色谱柱相同的位置，并选择35℃和45（也可根据工作温度设定）进行仪器校准。
b.按仪器说明书操作，接通电源，升温。温度稳定之后，记录温度计的读数，并开始计时。后，每10分钟记录一次读数，共7次，计算平均值。
c. 平均值与设定值间的差值为柱温设定值的误差，7个读数中的极大值与最小值之差是柱温稳定性。
（5）探测器标定（以紫外可见光探测器和二极管阵列探测器为例）。
（6）定性和定量重复性仪器校准
将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，用*甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，根据仪器配置的检测器，选择相应的测量参数如紫外可见光检测器和二极管阵列检测器波长设定为254 nm，灵敏度选择适中，基线稳定之后由进样系统注入一定体积的1.0×10-4 g/mL萘-甲醇溶液标准物质，其他检测器选择相应的参数。连续测定6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，最终计算相对标准差。
